Chương 5. THU NHẬN scFv ĐẶC HIỆU Cyfra 21-1

Thu nhận kháng thể đơn chuỗi scFv được thực hiện thông qua việc tạo thư viện kháng thể có bản chất từ gà. Gà được gây miễn dịch với kháng nguyên Cyfra 21-1, sau đó gen mã hóa các vùng biến đổi của kháng thể được tách dòng từ các tế bào lách và tủy xương. Các bước thu nhận kháng thể đặc hiệu kháng nguyên ung thư phổi Cyfra 21-1 được thực hiện theo các bước sau:

1. Tách RNA tổng số từ các tế bào tủy xương và tế bào lách gà đã gây miễn dịch theo quy trình của KIT “S.N.A.P” (Invitrogen).

2. Thu nhận cDNA bằng phản ứng Reverse Transcription-PCR (RT-PCR) theo quy trình của KIT “one-step RT-PCR” (Invitrogen) với các cặp mồi thích hợp.

3. Tách chiết và tinh sạch DNA plasmid, xử lý DNA plasmid với các enzyme giới hạn, gắn nối các đoạn DNA vào vector, điện di trên gel agarose, được tiến hành theo Sambrook và Russell (2001).

4. Phương pháp giải trình tự gen được thực hiện trên máy xác định trình tự ABI PRISMÚ 3100-Avant Genetic Analyzer (ABI, Mỹ), Viện Công nghệ Sinh học.