Chương 4. SỰ TƯƠNG TÁC CỦA S·Tag VÀ S·Protein TẠO HA OLIGOMER GIÚP TĂNG CƯỜNG TÍNH SINH MIỄN DỊCH TRÊN CHUỘT
GIỚI THIỆU
Một vaccine cúm tiềm năng được phát triển dựa vào kháng nguyên HA có cấu trúc phù hợp, được kỳ vọng sẽ tạo ra đáp ứng miễn dịch mạnh mẽ. Với mục tiêu tăng cường tính sinh miễn dịch của kháng nguyên HA tái tổ hợp, chúng tôi đã phát triển nhiều hướng nghiên cứu để tối ưu hóa cấu trúc của HA. Trong Chương 3, chúng tôi đã chứng minh rằng HA dạng trimer có khả năng kích thích sản sinh kháng thể trung hòa chống lại virus cúm A/H5N1. Câu hỏi nghiên cứu tiếp theo được đặt ra là liệu HA có thể sản xuất HA dạng oligomer từ các HA dạng trimer trong thực vật? Và liệu HA dạng oligomer có kích thích sản sinh đáp ứng miễn dịch tốt hơn HA dạng trimer ban đầu không?
Để trả lời các câu hỏi nghiên cứu trên, trong Chương 4, chúng tôi trình bày kết quả biểu hiện, tinh sạch, đánh giá hoạt tính sinh học và hoạt tính sinh miễn dịch của HA dạng oligomer (được tạo ra dựa vào tương tác của S·Tag và S·Protein) so sánh với HA dạng trimer.
S·Tag và S·Protein có nguồn gốc từ Ribonuclease A. Ribonuclease A (RNase A; EC 3.1.27.5) (Hình 4.1A) là một trong những loại protein được nghiên cứu kỹ lưỡng nhất trên thế giới (Richards & Wyckoff, 1971), bao gồm 124 amino axit (Raines et al.,1998). Sự phân cắt hạn chế của RNase A tuyến tụy bò với subtilisin tạo thành hai đoạn enzyme không có hoạt tính: 1-20 aa (S·Tag) và 21-124 aa (S·Protein). Hai đoạn peptit này tạo thành một phức hợp, được gọi là RNase S (Hình 4.1B), với sự phục hồi hoàn toàn hoạt tính của ribonuclease (Richards et al., 1959; Doscher et al., 1967). S·Tag có độ dài từ amino axit 1-15, được chứng minh là cần thiết để tạo phức đặc biệt với S·Protein. Tương tác mạnh mẽ giữa S·Protein và S·Tag gần đây đã được phát triển ứng dụng trong việc tinh sạch protein (Raines et al., 2000) hoặc để dẫn thuốc (Backer et al., 2002). Chúng tôi đã áp dụng công nghệ này để tạo ra các H5 oligomer. Để đạt được mục tiêu này, S·Tag đã được dung hợp với H5 và cấu trúc này đồng biểu hiện tạm thời với các biến thể của S·Protein oligomer trong thực vật.